antigenní test ... ou komerčně dostupných rychlých diagnostických testů typu Rychlý antigenní test, které umožňují rychlou diagnostiku malárie lidem, kteří jinak nejsou zběhlí v tradičních laboratorn...
Schematické schéma měrky

Testy na detekci malarických antigenů jsou skupinou komerčně dostupných rychlých diagnostických testů typu Rychlý antigenní test, které umožňují rychlou diagnostiku malárie lidem, kteří jinak nejsou zběhlí v tradičních laboratorních technikách pro diagnostiku malárie, nebo v situacích, kdy takové vybavení není k dispozici. V současné době je komerčně dostupných více než 20 takových testů (testování produktů WHO 2008). Prvním antigenem malárie vhodným jako cíl pro takový test byl rozpustný glykolytický enzym glutamátdehydrogenáza.[1] [2] [3] Žádný z rychlých testů není v současné době tak citlivý jako silný krevní film, ani tak levný. Hlavní nevýhodou při používání všech současných dipstick metod je, že výsledek je v podstatě kvalitativní. V mnoha endemických oblastech tropické Afriky je však kvantitativní hodnocení parazitémie důležité, protože velké procento populace bude pozitivní při jakémkoli kvalitativním testu.

Rychlé diagnostické testy malárie založené na antigenech

Malárie je léčitelná nemoc, pokud mají pacienti přístup k včasné diagnostice a rychlé léčbě. Rychlé diagnostické testy na bázi antigenů (RDT) hrají důležitou roli na okraji možností zdravotnických služeb, protože mnoho venkovských klinik nemá možnost diagnostikovat malárii na místě kvůli nedostatku mikroskopů a vyškolených techniků pro vyhodnocení krevních snímků. V oblastech, kde se nemoc nevyskytuje endemicky, mají navíc laboratorní technologové velmi omezené zkušenosti s detekcí a identifikací parazitů malárie. Stále větší počet cestovatelů z oblastí mírného pásu každoročně navštěvuje tropické země a mnoho z nich se vrací s malarickou infekcí. Testy RDT jsou stále považovány za doplněk konvenční mikroskopie, ale po určitém zdokonalení mohou mikroskop klidně nahradit. Testy jsou jednoduché a postup lze provádět na místě v polních podmínkách. Tyto testy používají krev z prstu nebo žilní krev, hotový test trvá celkem 15-20 minut a není k němu potřeba laboratoř. Práh detekce těmito rychlými diagnostickými testy se pohybuje v rozmezí 100 parazitů/µl krve ve srovnání s 5 parazity při mikroskopii tlustého filmu.

pGluDH

Plasmodium glutamát dehydrogenáza (pGluDH) vysrážená protilátkami hostitele Přesná diagnóza je stále důležitější vzhledem k rostoucí rezistenci Plasmodium falciparum a vysoké ceně alternativ k chlorochinu. Enzym pGluDH se nevyskytuje v červených krvinkách hostitele a Picard-Maureau a kol. jej v roce 1975 doporučili jako markerový enzym pro druhy Plasmodium. Test na markerový enzym malárie je vhodný pro rutinní práci a v současné době je standardním testem na většině oddělení zabývajících se malárií. Je známo, že přítomnost pGluDH představuje životaschopnost parazitů a rychlý diagnostický test využívající pGluDH jako antigen by měl schopnost rozlišit živé organismy od mrtvých. V Číně byl vyvinut kompletní RDT s pGluDH jako antigenem a nyní probíhají jeho klinické zkoušky. GluDH jsou všudypřítomné enzymy, které zaujímají důležité místo mezi metabolismem uhlíku a dusíku. U Plasmodia jsou přítomny jak enzymy GluDH [EC 1.4.1.4] závislé na nikotinamidadenindinukleotidu (NAD) [EC 1.4.1.2], tak enzymy GluDH závislé na nikotinamidadenindinukleotidu fosfátu (NADP); GluDH závislé na NAD jsou relativně nestabilní a pro diagnostické účely nejsou užitečné. Glutamátdehydrogenáza poskytuje oxidovatelný zdroj uhlíku používaný k produkci energie a také redukovaný nosič elektronů, NADH. Glutamát je hlavním donorem pro ostatní aminokyseliny v následných transaminačních reakcích. Mnohočetné úlohy glutamátu v dusíkové rovnováze z něj činí vstupní bránu mezi volným amoniakem a aminoskupinami většiny aminokyselin. Byla zveřejněna jeho krystalová struktura. Aktivita GluDH u P.vivax, P.ovale a P. malariae nebyla nikdy testována, ale vzhledem k významu GluDH jako enzymu větvícího se bodu musí mít každá buňka vysokou koncentraci GluDH. Je dobře známo, že enzymy s vysokou molekulovou hmotností (jako je GluDH) mají mnoho izozymů, což umožňuje rozlišení kmenů (za předpokladu správné monoklonální protilátky). Hostitel produkuje protilátky proti parazitickému enzymu, které ukazují na nízkou sekvenční identitu.

Protein bohatý na histidin II

Protein bohatý na histidin II (HRP II) je ve vodě rozpustný protein bohatý na histidin a alanin, který je lokalizován v několika buněčných kompartmentech včetně cytoplazmy parazita. Tento antigen je exprimován pouze trofozoity P. falciparum. HRP II z P. falciparum se podílí na biokrystalizaci hemozoinu, inertní, krystalické formy ferriprotoporfyrinu IX (Fe(3+)-PPIX) produkovaného parazitem. Značné množství HRP II je parazitem vylučováno do krevního oběhu hostitele a antigen lze detekovat v erytrocytech, séru, plazmě, mozkomíšním moku a dokonce i v moči jako vylučovaný protein rozpustný ve vodě. Tyto antigeny přetrvávají v cirkulující krvi i poté, co parazitémie vymizí nebo se výrazně sníží. Obvykle trvá přibližně dva týdny po úspěšné léčbě, než se testy založené na HRP2 stanou negativními, ale může to trvat i jeden měsíc, což snižuje jejich hodnotu při zjišťování aktivní infekce. U pacientů s revmatoidní artritidou s pozitivním revmatoidním faktorem byly hlášeny falešně pozitivní výsledky dipsticků. Vzhledem k tomu, že HRP-2 je exprimován pouze kmeny P. falciparum, dávají tyto testy negativní výsledky u vzorků obsahujících pouze kmeny P. vivax, P. ovale nebo P. malariae; mnoho případů malárie, která není malárií falciparum, proto může být chybně diagnostikováno jako malárie negativní (některé kmeny P. falciparum také nemají HRP II). Variabilita výsledků RDT na bázi pHRP2 souvisí s variabilitou cílového antigenu.

pLDH

P. falciparum laktátdehydrogenáza (PfLDH) je oxidoreduktáza o velikosti 33 kDa [EC 1.1.1.27]. Je posledním enzymem glykolytické dráhy, nezbytným pro tvorbu ATP a jedním z nejhojněji exprimovaných enzymů P. falciparum. Plasmodiová LDH (pLDH) z P. vivax, P. malariae a P. ovale) vykazuje 90-92% identitu s PfLDH z P. falciparum. bylo pozorováno, že hladiny pLDH se v krvi snižují dříve po léčbě než HRP2. V tomto ohledu je pLDH podobný pGluDH. Nicméně kinetické vlastnosti a citlivost na inhibitory cílené na vazebné místo kofaktoru se výrazně liší a lze je identifikovat měřením disociačních konstant pro inhibitory, které se liší až 21krát.

pAldo

Fruktózo-bisfosfát aldoláza [EC 4.1.2.13] katalyzuje klíčovou reakci v glykolýze a produkci energie a je produkována všemi čtyřmi druhy. Aldoláza P.falciparum je protein o velikosti 41 kDa a má 61-68% sekvenční podobnost se známými eukaryotickými aldolázami. Byla publikována její krystalová struktura. Přítomnost protilátek proti p41 v séru dospělých lidí částečně imunních vůči malárii naznačuje, že se p41 podílí na ochranné imunitní odpovědi proti parazitovi.

Reference

  1. Ling IT.; COOKSLEY S.; BATES PA.; HEMPELMANN E.; WILSON RJM. Antibodies to the glutamate dehydrogenase of Plasmodium falciparum. Parasitology. 1986, s. 313–324. Dostupné online. DOI 10.1017/S0031182000064088. PMID 3086819. (anglicky) 
  2. Rodríguez-Acosta A, Domínguez NG, Aguilar I, Girón ME. Characterization of Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase-soluble antigen. Braz J Med Biol Res. 1998, s. 1149–1155. DOI 10.1590/S0100-879X1998000900008. PMID 9876282. (anglicky) 
  3. Li Y, Ning YS, Li L, Peng DD, Dong WQ, Li M. Preparation of a monoclonal antibodies against Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase and establishment of colloidal gold-immunochromatographic assay. Di Yi Jun Yi da Xue Xue Bao = Academic Journal of the First Medical College of PLA. 2005, s. 435–438. PMID 15837649. (anglicky) 

Externí odkazy





  Go to top  

This article is issued from web site Wikipedia. The original article may be a bit shortened or modified. Some links may have been modified. The text is licensed under "Creative Commons - Attribution - Sharealike" [1] and some of the text can also be licensed under the terms of the "GNU Free Documentation License" [2]. Additional terms may apply for the media files. By using this site, you agree to our Legal pages [3] [4] [5] [6] [7]. Web links: [1] [2]